Pour commander le séquençage d'ADN, Veuillez remplir le bon de commande.
Veuillez indiquer sur le bon de commande séquençage toutes les informations qui nous sont nécessaires pour traiter au mieux votre commande (nom du vecteur, mode de purification, concentration et volume de l’échantillon, nom des amorces, …). Si vous avez besoin d’ajouter sur votre commande un service de biologie moléculaire ou de bioinformatique, veuillez l’indiquer sur le bon de commande de votre institut (vous trouverez les références correspondantes dans notre catalogue).
Imprimez le bon de commande de séquençage que vous enverrez
avec vos échantillons (voir préparation d’échantillon) par la poste ou par transporteur (conseillé) dans des tubes de 1.5 ml ou 0.5 ml (identifiés avec le nom de l’échantillon < 4 caractères ) à notre adresse :
MilleGen Service d' Analyse Génomique
Immeuble BIOSTEP - Bâtiment A rue Pierre et Marie Curie - BP38183 31681 Labège cedex (France)
Accusé de reception A la réception de votre commande nous envoyons un mail vous indiquant le début du traitement de votre commande et si nous avons reçu en bon état vos échantillons.
Résultats
Vous recevrez par email les séquences textes (.txt) et les chromatogrammes (.ab1). Le séquençage haut-débit peut être téléchargé directement de notre serveur de façon très sécurisée.
Délai
Le séquençage simple ou double brin sera envoyé par email 24h après réception de l’échantillon (si réception avant 11h) et 1.5 kb / semaine pour la marche sur l’ADN.
Les résultats sont dépendants de la qualité et d’éventuelles particularités de l’ADN. Si aucun résultat n’est obtenu après 3 essais nous facturerons 8.00 euros (set up) par réaction (référence SECH 0001).
Préparation des échantillons
Une très bonne qualité d’ADN est essentielle pour obtenir des résultats de qualité optimale. Nous vous conseillons de nous envoyer les clones bactériens afin que nous réalisions la préparation d’ADN. Nous recommandons d’utiliser des kits de mini ou midi preps. L’ADN doit être repris dans de l’eau (éviter le TE) et vérifier la concentration avec un spectrophotomètre et l’intégrité de l’ADN par électrophorèse sur gel d’agarose (joindre la photo). Les tubes contenant les échantillons doivent être bien fermés (avec du parafilm) dans un contenant rigide pour éviter tout écrasement. Vous pouvez envoyer vos échantillons à température ambiante.
Plasmides Envoyer 3µg de plasmide (0.2 µg/µl) dans 15 µl d’eau pure, 10µg de cosmide, BAC, PAC ou phage dans 25 µl d’eau pure. Si votre ADN a une particularité (% de GC important, répétition, hairpin,…), vous pouvez nous l’indiquer sur le bon de commande et éventuellement commander un séquençage d’échantillon difficile (référence SADN 0007).
Bactéries Vous pouvez nous envoyer les clones bactériens sous forme d’un stock glycérol, d’une culture fraîche dans du LB liquide ou sur LB agar.
Produits PCR
Envoyer le produit PCR purifié (20ng/100 bases) ou non purifié (commander une purification de produit de PCR : SPCR0002). Il est nécessaire d’éliminer les amorces, les dNTP et la polymérase avant de réaliser le séquençage d’un produit PCR. Le produit de PCR doit être vérifié par migration sur gel d’agarose (pas de bande parasite). Nous pouvons réaliser une purification sur gel de la bande d’intérêt (référence SPCR0005).
Amorces
Les amorces universelles sont fournies gratuitement (cf.liste des amorces). Pour les amorces spécifiques vous pouvez envoyer vos amorces, 15 µl à 10 µM sont nécessaires pour 1 à 5 réactions, ou indiquez les séquences de vos amorces sur le bon de commande (référence SSOL 0001).
